酶聯免疫試劑盒是較普遍常用的藥物殘留檢測方法，與儀器分析技術相比具有快速、簡便、準確(què)和靈敏度高等特點，但對實驗操作條件的要求比較嚴格。實驗條件主要由實驗室的操作環境和操作人員的操作熟練程度兩方面組成，但ELISA試劑盒對實驗室操作環境的要求是幾種藥物殘留檢測方法中相對較低的。由於(yú)大部分的試驗操作步驟都是由實驗人員來完成的，人爲的誤差相對嚴重一些。本人結合幾年的工作實踐介紹一下進行ELISA操作的時候應該注意的問題。

 酶聯免疫試劑(jì)盒操作的通用的規(guī)則
1 .要確保微量加樣器的準確性，可以使用蒸餾水和電子天平進行確定(由於蒸餾水不含雜質，溫度環境爲20％左右時，lmL的水可以看作是lg、200 L的水可以看作是0．2g)每一把微量加樣器都應該将其高量程和zui低量程進行確定。
2. 在使用微量加樣器時，吸取不同瓶子中液體後要更換槍頭，即使吸取标準品溶液。
3. 吸取液體時速度不易太快，以免産生氣泡，吸取的量不夠準確。
4. 将液體加到酶标孔中時，避免槍頭和孔内液體接觸，可使槍頭上的液滴和孑L壁接觸，液滴會自然流下去。吸入液體時的的方法是吸兩檔打一檔，防止由於槍頭的毛細作用使得部分液體不能流出而造成的誤差。
5. 吸取液體時要選用量程和需要量接近的微量加樣器吸，減少誤差。
6 .液體全部加入酶标孔後，将酶标闆放在桌子上平行輕輕搖晃30s，使液體充分混合均勻，也使其得到充分的反應。
7. 孵育時要使蓋闆膜封好酶标闆，防止水分蒸發，以防曲線不成線性。
8 .實驗前30min将試劑盒中的所有試劑從冰箱取出
，使試劑盒中的所有試劑與提取好的樣品溶液的溫度相同，酶标闆隻要取出所需量。
9. 由於底物顯色劑對光及其敏感，因此要避光保存。
10 .手工洗闆時每次加入洗滌液後。應靜置15～30s，不要将一個酶标孑L中的洗滌液濺入另一酶标孔中，防止交叉污染。甩去洗滌液後将酶标闆放在毛巾或吸水紙上拍幹。
11 .檢測吸光度前應将酶标儀打開，将其預熱30min以上。
12. 底物爲TMB，避免與皮膚相接觸。終止液爲2tool的濃硫酸具有腐蝕性，應盡量避免接觸皮膚
13 .孵育的時間應該嚴格按照試劑盒說明書上的時間爲準。
14 .要盡量做雙孔實驗，這樣才既能保證數據的準確性，又能反映出試劑盒的精密度。
15. 對樣本的結果有疑問時需要使用其他檢測方法進行驗證。
16 .沒有去離子水或雙蒸水時，可以使用娃哈哈純淨水配制溶液，切勿使用自來水。