我們知道,ELISA測(cè)定中影響要素較多,而且其操作中有一定的技術要求,在檢驗中除正常反響外,有時常可見到一些錯(cuò)誤結果(即假陽性或假陰性),那麽緻使試驗不成功的主要原因有哪些咧?
,标本的影響:溶血标本及混有紅細胞的血清選用ELISA法檢測易發生假陽性。或許是溶血血清中含有過氧化酶物質(紅細胞或血紅蛋白中的亞鐵血紅素),在洗刷過程中往往難以*洗脫,它可使H2O2釋放出原生态氧(O),從而催化底物四甲基聯苯胺可溶性的有色物質,即顯藍色,發生假陽性。所以嚴重溶血标本禁用。
第二,标本受細菌污染:因菌體中或許含有内源性辣根過氧化物酶,因而,被細菌污染的标本同溶血标本一樣,亦可發生非特異性顯色而攪擾測定結果。
第三,标本保存不妥:在冰箱中保存過久的标本,在間接法ELISA測定中會導緻本底過深、構成假陽性;爲克服上述攪擾,ELISA試劑盒測定的血清标本宜爲新鮮收集;如不能當即測定,5d内測定的血清标本可存放於4℃,1周後測定的血清标本應低溫凍存;凍存後融解的标本,蛋白質局部濃縮,分布不均,應充分混合後再測定,但混勻時應輕柔,不行激烈振動。
第四,标本凝結不全:在工作中,有時爲瞭争取時間快速檢測,常在血液還未開始凝結時即強行離心别離血清,使血清中仍殘留部分纖維蛋白原,在ELISA測定過程中能夠構成肉眼可見的纖維蛋白塊,易構成假陽性結果;因而血液标本收集後有必要使其充分凝結後再别離血清。