人肝癌細胞氟尿嘧啶耐藥株（BEL/FU）

人肝癌細胞氟尿嘧啶耐藥株(BEL/FU)

細胞介紹：
該細胞爲氟尿嘧啶處理的人肝癌耐藥細胞株
。
 
細胞培養步驟：
1)培養基及培養凍存條件準備：
注意：客戶收到細胞後按照下面的要求操作：培養瓶裏面的培養液是不含藥物的。待細胞長到70-80%的彙合度時，去掉培養液，加入含8000ng/mlFU藥物的培養液，放入培養箱，這段時間肯定會有小部分細胞懸浮起來，但是不要緊，通過換液可以去掉，下面的細胞待長滿就可以消化傳瓶瞭，這時可以一直用含 藥培養液來消化培養細胞，一兩代之後可以将藥物濃度提髙15000ng/ml，含藥 培養液用於細胞培養都沒問題的，凍存的時候就不要在凍存液裏面加藥物瞭。
1.準備 RPIVM-1640 培養基(RPMI-1640:GIBCO,添加 NaHC031.5g八,D-葡萄糖2.5g八，丙酮酸鈉O.llg八)，90%;胎牛血清
，10%，添加1%雙抗，20000ng/ml氟尿喃啶。
2.培養條件
：氣相：空氣，95%;二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度，培養箱濕度爲70%-80%。
3.凍存液：90%*培養基，10%DMSO,現用現配。液氮儲存。
 
2)細胞處理：
複蘇細胞：将含有lmL細胞懸液的凍存管在37°C水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鍾，棄去上清液，補加l-2mL培養基後吹勻。然後将所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或将細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養基，培養過夜）。第二天換液並檢查細胞密度。
細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
 
人肝癌細胞氟尿嘧啶耐藥株(BEL/FU)對於貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。力口2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)於培養瓶中，置於37°C培養箱中消化1-2分鍾，然後在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部 分變圓並脫落，迅速拿回操作台，輕敲幾下培養瓶後加少量培養基終止消化。按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻後吸出，在1000RPM條件下離心4分鍾，棄去上清液，補加l-2mL培養液後吹勻。将細胞懸液按1: 2到1: 5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中
。
細胞凍存：待細胞生長狀态良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養基後加入少量胰酶，細胞變圓脫落後，加入約lml含血清的培養基後 加入凍存管中，再添加1〇%DMSO後進行凍存。
 
注意事項：
收到細胞後，若發現幹冰已揮發幹淨、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們電聯。
所有動物細胞均視爲有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全台内操作，並請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌後方能丢棄。
 
細胞特性：
1)來源：肝癌細胞
2)形态：上皮細胞樣
3)含量：>lxl06 個/mL
4)污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測爲陰性
5)規格：T25瓶或者lmL凍存管包裝

人肝癌細胞氟尿嘧啶耐藥株(BEL/FU)運輸和保存：使用含有胎牛血清的2ml凍存管發送存活細胞。收到細胞後，可在1000RPM，常溫條件下，離心5min後，於潔淨操作台棄去上清，加入推薦使用的培養基後轉移至l〇cm培養皿或者T25培養瓶中培養，傳代達到細胞生長狀态良好時，再進行凍存。具體操作見細胞培養步驟。
細胞用途：僅供使用。