小鼠畸胎瘤細胞（P19）

小鼠畸胎瘤細胞(P19)
細胞介紹
加拿大渥太華大學的Me Burney等在1982年從雄性小鼠畸胎瘤中分離得到的，是一種能夠在體外培養的多能幹細胞,P19細胞團經RA誘導可分化成神經元、膠質細胞和纖維母細胞；而經二甲基亞砜(DM SO)誘導則分化成心肌、骨骼肌和平滑肌細胞;在P19細胞向神經元分化的過程中，神經發育相關基因的表達模式 基本模拟瞭正常小鼠神經發育過程，因此,P19目前被用作一個研究神經發育的 體外模型。P19細胞作爲研究神經分化機制的模型
，顯著區别於其他細胞系的四 大特點是：①它具有正常小鼠的二倍體核型，細胞分裂快，可在體外迅速大量擴 增，多次傳代也不喪失其分化能力。②P19細胞具有多種分化潛力，不同誘導條 件下可定向分化成不同類型的細胞，種植到孕鼠囊胚中能分化成多種類型細胞。 ③根據P19細胞誘導分化分階段進行的特點，能将神經分化的早期機制與參與 突起延伸的機制分開研究。④該細胞易於轉染，且轉染後仍能正常分化，适於進 行細胞基因研究
。通過轉染正常或突變的目的基因，增強或抑制它們的表達水平 可用於研究這些基因在神經分化中的作用。另外，利用反義RNA阻斷内源蛋白 的表達，可用來觀察這些蛋白在神經分化中的作用。
(references:
1.張金平等.全反式維甲酸體外誘導P19細胞向心肌方向分化.[」]中國組織化學與 細胞化學雜志.2012.1
2.梅宇欽等.建立經優化的促P19鼠胚胎癌細胞神經分化模型.浙江大學學報（醫 學版）2012.04)
 
細胞特性
1)來源：胚胎；崎胎癌
2)形态
：上皮細胞樣
3)含量：>lxl06個/mL
4)污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測爲陰性
5)規格：T25瓶或者lmL凍存管包裝
 
運輸和保存：可選擇幹冰運輸及發送複蘇存活細胞方式：（1)幹冰運輸，收到後 立即轉入液氮凍存或直接複蘇；（2)存活細胞，收到後應繼續生長，傳代達到細 胞生長狀态良好時，再進行凍存
。具體操作見細胞培養步驟。
細胞用途：僅供使用
。
 
小鼠畸胎瘤細胞(P19)細胞培養步驟
一.培養基及培養凍存條件準備：
1.準備MEMa培養基(MEMa+培養基(GIBCO,添加NaHC〇31.5g八，肌醇43.2mg八，葉酸8.82mg八,0-巯基乙醇7.8mg八)，90%; BCS，7.5%;胎牛血清，2.5%。
2. 培養條件：氣相
：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度，培養箱濕度爲70%-80%。
3.凍存液：90%*培養基
，10%DMSO,現用現配。液氮儲存。
二.細胞處理：
複蘇細胞：将含有1mL細胞懸液的凍存管在37°C水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鍾，棄去上清液，補加1-2mL培養基後吹勻。然後将所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或将細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養基，培養過夜）。第二天換液並檢 查細胞密度。
細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
 
對於貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2■加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)於培養瓶中，置於37C培
養箱中消化1-2分鍾
，然後在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓並脫落，迅速拿回操作台，輕敲幾下培養瓶後加少量培養基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻後吸出，在1000RPM條件下離心4分鍾，棄去上清液，補加1-2mL培養液後吹勻。
4.将細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
 
對於懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一
：收集細胞，1000RPM條件下離心4分鍾，棄去上清液，補加1-2mL 培養液後吹勻，将細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數換液方式，棄去半數培養基後，将剩餘細胞懸起，将細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
 
細胞凍存：待細胞生長狀态良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養基後加入少量胰酶，細胞變圓脫落後，加入約1ml含血清的培養基後加入凍存管中，再添加10%DMSO後進行凍存。懸浮細胞凍存時，應将細胞收集，1000RPM條件下離心4分鍾，少量保存上清液（防止細胞吸走)，加 入部分新鮮培養基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO後進行凍 存。
 
小鼠畸胎瘤細胞(P19)注意事項：
收到細胞後，若發現幹冰已揮發幹淨、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們電聯。
所有動物細胞均視爲有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全台内操作，並請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌後方能丢棄。