人永生化表皮細胞（HaCat）

人永生化表皮細胞(HaCat)
細胞介紹
該細胞源自一位 62 歲患有黑色素瘤男性的病竈外圍正常皮膚，角蛋白、角化細胞交聯外膜蛋白、中間絲相關蛋白陽性。
 
細胞特性
1.  來源：正常表皮細胞
2.  形态 ：上皮細胞樣
，貼壁生長
3.  含量：>1x10 6 個/mL
4.  污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測爲陰性
5.  規格：T25 瓶或者 1mL 凍存管包裝
 
運輸和保存：使用含有胎牛血清的 2ml 凍存管發送存活細胞。收到細胞後，可在 1000RPM，常溫條件下，離心 5min 後，於潔淨操作台棄去上清，加入推薦使用的培養基後轉移至10cm 培養皿或者 T25 培養瓶中培養，傳代達到細胞生長狀态良好時，再進行凍存。具體操作見細胞培養步驟。
 
人永生化表皮細胞(HaCat)細胞用途：僅供使用
。
細胞培養步驟
一． 培養基 及 培養 凍存 條件準備：
1）準備 DMEM 培養基(DMEM，GIBCO)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO)，15%。

2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37 攝氏度，培養箱濕度爲 70%-80%。
3）凍存液：90%*培養基，10%DMSO，現用現配
。液氮儲存。
 
二． 細胞 處理 ：
1） 複蘇細胞：将含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入 4mL 培養基混合均勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鍾，棄去上清液，補加 1-2mL 培養基後吹勻。然後将所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或将細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養基，培養過夜）。第二天換液並檢查細胞密度。
2） 細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養。對於貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養上清，用不含鈣
、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 2ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培養瓶中，置於 37℃培養箱中消化 1-2 分鍾，然後在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓並脫落，迅速拿回操作台，輕敲幾下培養瓶後加少量培養基終止消化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻後吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分鍾，棄去上清液，補加 1-2mL 培養液後吹勻。
4. 将細胞懸液按 1：2 到 1：5 的比例分到新的含 8ml 培養基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀态良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養基後加入少量胰酶，細胞變圓脫落後，加入約 1ml 含血清的培養基後加入凍存管中，再添加 10%DMSO 後進行凍存。
 
人永生化表皮細胞(HaCat)注意事項：
1. 收到細胞後，若發現幹冰已揮發幹淨、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們電聯。
2. 所有動物細胞均視爲有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全台内操作，並請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌後方能丢棄。