人髙轉移肝癌細胞（HCCLM3）

人髙轉移肝癌細胞(HCCLM3)
細胞介紹：
用人肝癌細胞株MHCC97-H接種裸鼠，進行3次肺轉移篩選，取肺轉移瘤建成皮下接種後高度自發性肺轉移的肝癌細胞系。
 
細胞培養步驟：
1)培養基及培養凍存條件準備：
1.準備DMEM培養基(DMEM，GIBCO， 北美胎牛血清(United States，GIBCO)，10%;雙抗 1%。
2.培養條件：氣相：空氣，95%;二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度，培養箱濕度爲70%-80%。
3. 凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。液氮儲存。
 
2)細胞處理：
1.複蘇細胞：将含有lmL細胞懸液的凍存管在37°C水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鍾，棄去上清液，補加l-2mL培養基後吹勻。然後将所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或将細胞懸液加入l〇cm皿中，加入約8ml培養基，培養過夜）。第二天換液並檢 查細胞密度。
2.細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
 
人髙轉移肝癌細胞(HCCLM3)對於貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。力口2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)於培養瓶中，置於37°C培養箱中消化1-2分鍾，然後在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓並脫落，迅速拿回操作台，輕敲幾下培養瓶後加少量培養基終止 消化。按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻後吸出，在1000RPM條件下離心4分鍾，棄去上清液，補加l-2mL培養液後吹勻。将細胞懸液按1: 2到1: 5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者 瓶中。
 
3.細胞凍存：待細胞生長狀态良好時，可進行細胞凍存。
 
下面T25瓶爲例；
細胞凍存時
，棄去培養基後，PBS清洗瓶底1-2次後加入lml胰酶，細胞變圓脫落後，加入2ml*培養基終止消化，可使用血球計數闆計數。1000RPM離心5分鍾去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至終濃度爲 10%。加入DMSO後迅速混勻，按每lml的數量分配到凍存管中，注意凍存 管做好标識。本公司按每個凍存管細胞數目大於1X106個細胞凍存。
将凍存管置於程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以後轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
 
注意事項：
收到細胞後，若發現幹冰己揮發幹淨、凍存管瓶蓋脫落
、破損及細胞有污染，請立即與我們電聯。
所有動物細胞均視爲有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全台内操作，並請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌後方能丢棄。
 
細胞特性：
1)來源：肝癌
2)形态：上皮細胞樣，胞質内有顆粒
3)含量：>lxl06 個/mL
4)污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測爲陰性
5)規格：T25瓶或者lmL凍存管包裝
 
人髙轉移肝癌細胞(HCCLM3)運輸和保存：可選擇幹冰運輸及發送複蘇存活細胞方式：（1)幹冰運輸，收到後 立即轉入液氮凍存或直接複蘇；（2)存活細胞，收到後應繼續生長，傳代達到細胞生長狀态良好時，再進行凍存。具體操作見細胞培養步驟。
細胞用途：僅供使用。