T4 DNA Ligase

中文名稱
：T4 DNA Ligase

英文名稱(chēng)
：T4 DNA Ligase

CAS号：9015-85-4

分子量：55.3kDa，單(dān)體(tǐ)

T4 DNA Ligase

級别：BR

來(lái)源：含有T4噬菌體克隆基因30的大腸(cháng)杆菌

活性定義：是指在ATP-PPi交換反應中，37℃、30分鍾内将1nmol [32PPi]轉換爲Norit可吸收形式所需的酶量（weiss單位，1個weiss單位相當於(yú)約200個粘性末端連接單位。1個粘性末端連接單位：20ul反應體系（50mM Tris-HCL(PH7.5), 10mM DTT, 10mM MgCL2, 1mM ATP, 25ug/ml BSA, 12uM(300ug/ml)的5-DNA末端）中，在16℃、30分鍾内連接50%連接HindIII酶切的Lambda DNA 産(chǎn)物所需的酶量）

抑制劑：當(dāng)反應體系中NaC1或KC1的濃度超過(guò)200 mM時，可強烈抑制T4 DNA Ligase活性

失活：65℃加熱(rè)10分鍾(zhōng)或70℃加熱(rè)5分鍾(zhōng)

T4 DNA Ligase

注意：T4 DNA Ligase與DNA結合會改變(biàn)條帶的瓊脂糖凝膠電泳遷移率，爲避免此現象，電泳前需處理樣本或分子量标準。樣本處理如下：樣本與Fermentas公司6×DNA Loading Dye&SDS溶液（#R1151）混合，75℃加熱5分鍾或65℃加熱10分鍾後冰浴保存；轉化時，連接産(chǎn)物的體積不得超過感受态細胞體積中的10%；電轉化之前，先用氯fang抽提方法除去連接混合物中的T4 DNA Ligase，然後經乙醇沉澱純化抽提産(chǎn)物

質量控制：測(cè)試表明無内切脫氧核糖核酸酶、核糖核酸酶、磷酸酶污染。功能檢(jiǎn)測(cè)：粘性末端或平末端DNA的連接能力

T4 DNA Ligase

性狀(以下信息僅供參(cān)考)：液體。該酶催化雙鏈DNA或RNA中毗鄰的5'磷酸基團和3'-羟基末端之間形成磷酸二酯鍵，還可以修複雙鏈DNA、RNA或DNA/RNA複合體中的單(dān)鏈切口，連接DNA的粘性和平末端，但該酶對單(dān)鏈核酸無酶活性。該酶需要輔因子ATP

用途：本品僅供，不得用於(yú)其它用途。(以下用途僅供參考)粘性末端或平末端雙鏈DNA的連接；雙鏈寡核苷酸接頭與雙鏈DNA連接；雙鏈DNA、RNA或DNA-RNA複合體中缺口的修複；連接酶介導的RNA檢測；位點特異性突變(biàn)；擴增片段長度多态性

保存： -20°C

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