小鼠成纖維細胞 （L-929）

小鼠成纖維細胞 (L-929)
細胞介紹
1948年三月建立瞭NCTCclone929(小鼠結締組織)，細胞系L的克隆。細胞系L是早建立的連續培養細胞系之一，而clone929是早的克隆株。從一隻100日齡的雄性C3H/An小鼠的正常皮下疏松結締組織入脂肪組織中建立瞭親本細胞系L。第95代的細胞系L使用毛細管法分離單細胞建立瞭 clone929。檢測發現 鼠痘病毒陰性。
 
細胞特性
1)來源：組織：皮下結締組織；疏松結締組織及脂肪品系：C3H/An
2)形态：成纖維細胞
3)含量：>lxl06 個/mL
4)污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測爲陰性
5)規格：T25瓶或者lmL凍存管包裝
運輸和保存：可選擇幹冰運輸及發送複蘇存活細胞方式：（1)幹冰運輸，收到後立即轉入液氮凍存或直接複蘇；（2)存活細胞，收到後應繼續生長，傳代達到細胞生長狀态良好時
，再進行凍存。具體操作見細胞培養步驟。
細胞用途：僅供使用。
 
小鼠成纖維細胞 (L-929)細胞培養步驟
1)培養基及培養凍存條件準備：
1.準備MEM培養基(MEM:GIBC0)，90%;馬血清(GIBC0,貨 号 16050-122)，10%。
2.培養條件：氣相：空氣，95%;二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度，培養箱 濕度爲70%-80%。
3. 凍存液：90%*培養基，10%DMSO,現用現配。液氮儲存。
2)細胞處理：
複蘇細胞
：将含有lmL細胞懸液的凍存管在37°C水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻
。在1000RPM條件下離心4分鍾，棄去上清液，補加l-2mL培養基後吹勻。然後将所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或将細胞懸液加入l〇cm皿中，加入約8ml培養基，培養過夜）。第二天換液並檢 查細胞密度。
細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養
。
 
對於貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
力口2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)於培養瓶中，置於37°C培養箱中消化1-2分鍾，然後在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓並脫落，迅速拿回操作台，輕敲幾下培養瓶後加少量培養基終止消化。
按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻後吸出，在1000RPM條件下離心4分鍾，棄去上清液，補加l-2mL培養液後吹勻。
将細胞懸液按1: 2到1: 5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
 
細胞凍存：待細胞生長狀态良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養基後加入少量胰酶，細胞變圓脫落後，加入約lml含血清的培養基後加入凍存管中，再添加1〇%DMSO後進行凍存。
 
小鼠成纖維細胞 (L-929)注意事項：
收到細胞後，若發現幹冰己揮發幹淨、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們電聯。
所有動物細胞均視爲有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全台内操作，並請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌後方能丢棄。